Mathias Zachariassen är utbildad på Operahögskolan i Stockholm med Gunnar Suttner och Nicolai Gedda som sångpedagoger. Efter debuten som Eurimedes i Telemanns Orpheus i samband med Berliner Staatsopers gästspel i Innsbruck 1994 har Mathias gästat många av världens stora operahus, bl.a. Metropolitan Opera, Wiener Staatsoper, Opéra Bastille, Glyndebourne Festival, Drottningholmsteatern, Opernhaus Zürich, Göteborgsoperan och Kungliga Operan, i roller som Don José (Carmen), Hertigen (Rigoletto), Tamino, Ferrando, Don Ottavio, David (Meistersinger) och Steuermann (Fliegende Holländer).

Mathias har även regisserat Mascagnis Cavalleria Rusticana i Dala-Floda Operafest, där han även sjöng tenorpartiet Turiddu.

1999 erhöll Mathias Eberhard Waechter-medaljen för sina interpretationer av David (Meistersinger) på Wiener Volksoper samt Roudi i Rossinis Guillaume Tell på Wiener Staatsoper.